人眼分辨率:100µm
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光学显微技术:
- 普通光学显微镜:
- 分辨率(R,resolution):
Rx,y与光波长(λ)成正比,与数值孔径(NA),即镜口率(n·sinθ)成反比,空气n=1,镜油n≈1.4,θ为标本对物镜镜口张角的半角
Rz与NA2成反比
Rx,y理论上0.2µm,实际上0.5µm - 最大放大倍数:人眼分辨率/光镜分辨率 #?
- 固定:甲醛、戊二醛,与蛋白质的游离氨基酸形成共价键
- 支持剂:蜡/树脂,包埋
- 切片:黏附在载玻片上
- 染色:
- 苏木精:亲和负电荷,核酸
- 伊红:酸性染料,细胞质
- 苏丹:脂肪
- 分辨率(R,resolution):
- 相差显微镜:光程差——振幅差,观察活细胞
- 暗视野显微镜:仅被照射样品的散射光进入物镜,观察轮廓
- 荧光显微镜:荧光物质吸收激发光、发出发射光,两组滤光片分别只通过两者
- 共聚焦激光扫描显微镜:光学切片,三维图像,多用于荧光标记物质
- 超分辨光学显微镜:克服衍射导致的光学显微镜分辨率的Abbe限度
- 普通光学显微镜:
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电子显微技术:
- 分辨率:0.1nm~2nm
- 透射电子显微镜:标本密度大,则电子流量少,为暗区
- 标本:
因为置于高真空,含水的活细胞无法观察,用戊二醛、四氧化锇双重固定
放入液态单体树脂浸透,加温形成固体包埋块
超薄切片
重金属盐类进行电子染色,增大反差(与原子序数有关),细胞不同成分对盐类亲和力不同 - 获取三维图像:
- 金属投影法:直接观察或金属复型
- 冰冻断裂:细胞膜性结构的内部构造
- 冰冻蚀刻:细胞的内部构造
- 标本:
- 扫描电子显微镜:观察样品表面立体结构,重金属膜覆盖,二次电子成像
- 冷冻电子显微镜
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其他显微技术:
- 扫描隧道显微镜
- 原子力显微镜